Peptit yoğunlaşması için reaktifler

Günümüzde peptitlerin sentezinde, esas olarak peptit reaksiyonlarını tamamlamak için karboksil aktivasyon yöntemleri kullanılmaktadır. Kullanılan en eski yöntemler, amino asitleri asit klorürlere, azitlere, simetrik anhidritlere ve karışık asit anhidritlere aktive etmekti. Ancak bu koşullar altında amino asit rasemizasyonunun varlığı, reaksiyon reaktiflerinin tehlikesi ve hazırlanmasının karmaşıklığı nedeniyle yavaş yavaş bunların yerini daha sonra yapılarına göre iki türe ayrılabilen kondenzasyon reaktifleri almıştır. Ana kondensasyon reaktifleri şunlardır: Karbodiimid tipi, onyum tuzu tipi (Uronyum).

Temel olarak şunları içerir: DCC, DIC, EDC.HCl bekleyin. DCC kullanın reaksiyonu gerçekleştirin, DCU nedeniyle DMF mevcuttur. Çözünürlüğü çok azdır ve beyaz çökelti üretir, bu nedenle genellikle katı-faz sentezinde kullanılmaz. Ancak ucuz olduğundan sıvı-faz sentezinde filtrasyon yoluyla uzaklaştırılabilir ve hala yaygın olarak kullanılmaktadır. EDC.HCl Suda çözünürlüğü nedeniyle polipeptit ve proteinlerin bağlanmasında sıklıkla kullanılır ve oldukça başarılıdır. Ancak bu tip kondenzasyon reaktifinin en büyük dezavantajlarından biri, tek başına kullanıldığında yan reaksiyonların daha fazla ortaya çıkmasıdır. Ancak araştırmalar, HOBt, HOAt gibi reaktiflerin aktivasyon süreci sırasında eklenmesi durumunda yan reaksiyonları çok düşük bir aralıkta kontrol edebildiğini göstermektedir. Reaksiyon mekanizması aşağıdaki gibidir:

Şekil 2 DIC Aktivasyon reaksiyon mekanizması

Onyum tuzu tipi yoğunlaşma reaktifleri yüksek reaktiviteye ve hızlı hıza sahiptir ve şu anda yaygın olarak kullanılmaktadır; başlıcaları: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP bekleme. Bu reaktifin kullanımı sırasında diizopropiletilamin (DIEA), N- Metilmorfolin (NMM) gibi bir organik bazın eklenmesi gerekir. Amino asit ancak bu reaktif eklendikten sonra etkinleştirilebilir. Reaksiyon mekanizması aşağıdaki gibidir:

Katı-fazlı peptid sentezinde kullanılan reçineler genellikle boyutları 75 ila 150 μm arasında değişen polistiren-divinilbenzen malzemeleridir. Çapraz-bağlanma derecesi %1-2 arasındadır ve şu anda kullanılanların çoğu %1'dir, çünkü bu çapraz bağlanma derecesinde reçine DMF, DCM iyi şişme özelliklerine sahiptir ve üç-boyutlu ağ yapısı vardır ve reaktan moleküller reçine içinde serbestçe hareket edebilir. Reçinenin en kritik kısmı, bir ucu reçineye bağlanan, diğer ucu ise reaksiyon alanı görevi gören bağlantı koludur. Şu anda yaygın olarak kullanılan reçineler şunlardır: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. PAM'de BOC stratejisinde MBHA kullanılır, çünkü aside karşı çok stabildir, HF, TFMSA olması gerekir. Sadece güçlü asit koşulları altında kesilebilir.

Katı-fazlı peptid sentezi tamamlandıktan sonra, peptidi reçineden ayırmak ve daha sonra buzlu eter ile çökeltmek, çökeltiyi santrifüjleme yoluyla toplamak ve son peptid ürününü elde etmek için HPLC'yi ayırmak, saflaştırmak ve dondurarak-kuru tutmak için uygun bir ayırma reaktifi seçilmelidir.

Seçilen reçineler ve amino asit dizileri farklı olduğundan, parçalama sırasında seçilen parçalama yöntemleri tam olarak aynı değildir. Genellikle bölünme koşulları asidik koşullar altında seçilir. PAM için, MBHA Reçinesi, genellikle kullanılan HF Kesme, p-kresol, p{-merkaptofenol, anisol ve diğer reaktiflerin kesme işlemi sırasında eklenmesi gerekir. Ve Wang, Rink-Amid, Trt Reçinesi için genellikle TFA Kesimi kullanılır, kesme işlemi sırasında etilen glikol, anizol sülfit, su, triizopropilsilan, fenol vb. ekleyin.

Bu katkı reaktifleri esas olarak karbokatyon yakalama reaktifleri olarak kullanılır. Amaç, bölünme reaksiyonu sırasında oluşan karbokatyonu yakalamak ve bu karbokatyon iyonlarının bazı amino asit yan zincirlerine saldırısının neden olduğu yan reaksiyonları azaltmaktır. Yan reaksiyonlar üretme olasılığı daha yüksek olan amino asitler şunları içerir: Trp, Tyr. Kesme reaktifinin dozajı genellikle 10-15 ml/g reçinedir.

Yaygın olarak kullanılan kesme oranları: HF/p-kresol/p-tiyokresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), Reaksiyon genellikle oda sıcaklığında 2 saat-4 saat süreyle gerçekleştirilir.

Katı-fazlı peptit sentezinde, sıklıkla peptit sentezinin başarısız olması veya düşük sentez verimliliği sorunuyla karşılaşırız. Bunun ana nedeni peptit dizisinden kaynaklanmaktadır, çünkü reçine üzerinde bazı peptit dizileri oluşur. -Katlanma, reçinenin şişme özelliklerini değiştirir ve aynı zamanda reaksiyonun aktif bölgelerini reçineye gömerek reaksiyonun ilerlemesini zorlaştırabilir. Mevcut raporlar şunu gösteriyor

Karışık solventler, DMSO/DMF, 6N Guanidin/DMF solüsyonu kullanın

Reaksiyon sıcaklığını artırın veya mikrodalga yöntemini kullanın

Kaotropik tuzlar kullanın, LiCl, NaClO4 bekleyin.

Reçine yükünü azaltırken (0,05-0,2 mmol/g) daha iyi şişme özelliklerine sahip PEG-PS reçinesi kullanın

​